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将32 P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。

杂交结束后，去除杂交液，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶液中，轻轻振摇5分钟，并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次，同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜两次，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景很高或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。

原位杂交技术（in situhybridization）是以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异核酸分子的技术。使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以自显影或细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

可以检测cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各种种属的标本，包括哺乳动物、爬行动物、菌、植物标本。也可以检测组织芯片。

预杂交

1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的HYB＋取代HYB－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

杂交

1）吸去预杂交的HYB＋，加上100ul已加入探针的HYB＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。

注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。

原位杂交技术在许多领域都有应用，以下是其中几个具体应用：

细胞生物学和发育生物学：在细胞生物学和发育生物学领域，原位杂交技术常被用于研究基因的表达和定位。例如，通过标记特定基因的探针，可以在细胞或组织中检测特定基因序列的存在和分布，进而了解基因在细胞分化、发育和功能中的作用。

基因组学和遗传学研究：原位杂交技术也可用于基因组学和遗传学研究。例如，通过标记多个基因探针，可以检测基因组中的多个基因序列，从而进行基因定位、基因表达谱分析、基因突变检测等研究。

病毒学和病原微生物研究：在病毒学和病原微生物学领域，原位杂交技术常被用于检测和定位病毒、细菌等病原微生物。例如，通过标记特异性或核酸探针，可以检测组织中病原微生物的存在、情况以及分布特征，从而为疾病的预防、诊断和提供依据。

总之，原位杂交技术在生物学、医学、基因组学、遗传学、病毒学和病原微生物学等领域都有广泛的应用价值，为人类认识生命现象、探究疾病机制和提供了有力的技术支持。