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PCR实验室各区功能及主要设备:试剂准备区:主要进行试剂的制备,分装和主反应混合液的制备。试剂盒用于样品制作的材料应直接运送至该区域。
样品制备区:主要进行样品的保存,核酸提取,贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。 本区主要设备有冰箱,生物安全柜,离心机,加样器,振荡器等。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染,压力一般设计为+10Pa。
扩增区:主要进行DNA扩增项目。已制备的DNA模板(来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有:冰箱,加样器,离心机,扩增仪等。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶从本区漏出,压力一般设计为-25Pa。
扩增产物分析区:主要进行扩增产物的测定。本区主要设备有加样器,、和水浴箱等。本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域,压力一般设计为-25Pa。
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PCR实验室注意事项:区域大小设置:样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱,空间应大一些。而试剂准备区,扩增区,扩增产物分析区,空间可以相对小一些。应急装置配备:试剂准备区,样品制备区应设紧急洗眼器,以保证操作人员的安全。
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PCR实验室为什么要进行三区隔离?既然PCR三区隔离的目的是为了阻断气溶胶的交流,请注意以下细节,思考一下气溶胶来自哪里:
1. 每个区域都应配备专门的移液器,不可交叉混用。我们的一位用户拿电泳室的移液器加模板,阴性对照扩出了很亮的条带。
2. 每个区域都应配备专门的移液器吸头,不可交叉混用。
3. 如果条件允许,在PCRⅢ区工作结束后再次进入PCR I区需要更换实验服、一次性鞋套、帽子、手套。
4. 在PCR I区、PCRⅡ区配备带滤芯吸头。
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