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PCR实验室的主要特点:由于疫情的特殊情况,核酸检测任务大幅度增加,各地对移动PCR实验室需求猛增;有关移动PCR实验室的建设,必须严格按照一般PCR实验室的标准,但移动PCR实验室有其自身的特殊性。移动PCR实验室空间有限,又在户外使用。所以,在保证满足基本条件外,对空调及新风机组有特殊的要求,个别PCR移动实验室按照普通的PCR实验室建设,造成不良的工作环境,工作人员的舒适性受到了很大的影响。
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PCR实验室为什么要进行三区隔离?
PCR反应过程中不断进行升温降温,液体蒸发又冷凝,PCR管中部分空气形成气溶胶,携带大量的DNA扩增产物(注意,1ng扩增产物中可作为模板的DNA片段数量,超过1ng起始模板中可扩增DNA片段数量的几百万倍甚至更高。比如人的基因组DNA有30亿个bp,要扩增的单拷贝基因片段是300bp,1ng起始模板中可以作为模板DNA片段只占总起始模板DNA总量的千万分之一)。如果在实验室打开含PCR扩增产物的管盖,大量携带DNA扩增产物的气溶胶就会涌出,扩散到空气中,从而对环境造成污染。
虽然在整个空间环境中DNA的含量很低,但由于理论上只要有1个可做为模板的DNA片段也能PCR扩增成功,这就是为什么在污染环境中阴性对照也能扩增出条带的原因。所以在PCR实验室(比如临床PCR检验实验室),通常有四区隔离(或至少是三区隔离)的要求。
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PCR实验室为什么要进行三区隔离?
试剂配制区(Ⅰ区):洁净的区域,保持微正压使得外界空气无法进入隔离污染源。并且阴性模板应该在此区加入PCR管并盖盖,严禁在此区域打开、存放装有DNA模板的离心管。
DNA模板添加区(Ⅱ区):压力比Ⅰ区低,保证内部空气不外泄,以免阳性模板的气溶胶对外界环境造成污染。
扩增及PCR产物分析区(Ⅲ区):保持负压,使得内部空气不外泄,以免扩增产物的气溶胶对外界环境造成污染。操作时压力遵循Ⅰ区→Ⅱ区→Ⅲ区单一方向进行,不可逆向进行。
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PCR实验室的设计规范
1、区域布局合理
PCR扩增试验室原则上分为4个独立的工作区,即试剂准备区、样品处理区、核酸扩增区、产物分析区。为避免交叉污染,必须严格按照单一方向进入每个工作区,每个实验区之间的试剂和样品转移应通过转移窗口进行。
2、标准的三区分隔
PCR过程可分为试剂制备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区,整个实验区设置有一个整体缓冲走廊,每个独立的实验区都设有一个缓冲区。
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