外泌体研究开展的如火如荼。不论是 SCI 文章的发表还是各类基1金的申请,外泌体相关研究表现都非常亮眼。外泌体提取后,研究人员面临的一个重要问题就是,我提取的是不是外泌体?如果是的话,质量如何?
现阶段,对外泌体进行鉴定主要有三种主流的方法:电镜、粒径和 Western blot 分析靶标物。之前我们已经对外泌体电镜进行了总结,今天我们来看看外泌体的粒径分析。
外泌体粒径分析原理
外泌体粒径分析方法为纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle tracking Analysis, NT A),其原理是对每个颗粒的布朗运动进行追1踪和分析,结合 Stockes-Einstein 方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NT A技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一。相较于其他表征方式,NT A技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。
样本准备
1. 提供外泌体悬液即可,未纯化样本也可以上机检测;
注意:NTA仅提供粒径分布情况和颗粒浓度,无法区分外泌体与非外泌体成分;当然也可先利用外泌体特异性标记物进行荧光标记,则可以获知外泌体特定亚群的含量。
2.仪器的检测区间是10^7 particles/ml,且有浓度检测下限,为10^5 particles/ml,进样量不少于2ml;一般来说,会对样本稀释后进样;
我司无法准确建议送样量;检测需要量与样本本身浓度有关,样本浓,则用量小,反之则多,根据检测经验,样本取用量一般在2µl-100µl不等,取用量大于50µl时大多由于样本分泌量过低、提取失败或者对样本有过多稀释。一般建议送样量不低于30µl,如样本珍贵,可联系我司寄回,运费视具体情况收取。
抑制基质金属蛋白酶(MMPs)
MMPs主要负责细胞外基质的降解,尤其是构成结构的胶原纤维与弹力纤维,故MMPs是调节皮肤光老化的主要靶标之一。
外泌体对MMPs的调节能减少层弹性和胶原纤维的损伤,改善层老化。
通过减少氧化应激来延缓皮肤衰老
紫外线辐射可产生大量ROS(即活性氧),影响成纤维细胞功能,诱导MMPs合成,损伤细胞外基质成分(如胶原蛋白、弹力蛋白等)。衰老成纤维细胞较正常细胞可产生更多ROS。
研究发现,外泌体可减少ROS产生。通过抑制ROS能减少皮肤的氧化应激损伤,从而改善改善衰老相关细胞损伤的潜力。
作为一种新兴的再生抗老技术,外泌体已经被证明了拥有对抗1衰老,促进细胞新生等多种功效。通过再生皮肤细胞,标本兼治,具有抗老+维养的双重属性,不仅抗1衰老,还能帮助肌肤实现真正年轻化。
外泌体在修复皮肤损伤方面的优1秀能力,让它在某些科美操作后的修复护理,加强皮肤耐受力、提升科美效果等方面也有很好的效果。