实验动物各种体液、的采集方法
消化液的采集
(一) 唾液
1. 直接抽取法 在急性实验中, 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液,此法非常简单,但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。
2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液,要用手术方法将腮腺导管开口移向体外,即以腮腺导管为中心,切成一直径约2~3cm的圆形粘膜片,将此粘膜片,与周围组织分开,穿过皮肤切口引到颊外,将带有导管开口的粘膜片与周围的皮肤缝合,腮腺分泌的唾液就流出颊外。本模型采用离乳大鼠是由于幼鼠在发育期阶段对dan碱的需求量较大,因dan碱缺乏造成对机体伤害的敏感性自然比成年动物更强。这种方法可以收集到较纯净的唾液。
(二)胃液
1. 直接收集胃液法 急性实验时,先将动物,将插胃管经口插入胃内,在灌胃管的出口连一,用此可收集到胃液,此法适用于狗等大型动物。病理组织学检查模型大鼠在发生早期(1周以内)主要是肺泡上皮细胞发生了破坏,而在晚期阶段则可见Ⅱ型肺泡上皮细胞增多,以及肺泡间隔内局限性胶原纤维及弹性纤维的聚集。如是大鼠,需手术剖腹,从幽门端向胃内插入一塑料管,再由口腔经食道将一塑料管插入前胃,用pH7.5、35℃左右的生理盐水,以12ml/h的流速灌胃,收集流出液,进行分析。
2. 制备胃瘘法 在慢性实验中,收集胃液多用胃瘘法,如全胃瘘法、巴氏小胃瘘法、海氏小胃瘘法等。对于猴、狗、猫等动物有时可不做标记,只记录它们的外表特征和毛色即可。制备小胃是将动物的胃分离出一小部分,缝合起来形成小胃,主胃与小胃互不相通,主胃进行正常消化,从小胃可收集到纯净的胃液。应用该法,可以待动物恢复健康后,在动物清醒状态下反复采集胃液。
(三)胰液和胆汁
在动物实验中,主要是通过对胰总管和胆总管的插管而获得胰液或胆汁。xue清LH和FSH水平在10~12d时降至zui低,以后逐渐上升至56d时恢复正常。狗的胰总管开口于十二指肠降部,在紧靠肠壁处切开胰管,结扎固定并与导管相连,即可见无色的胰液流入导管。大鼠的胰管与胆管汇集于一个总管,在其入肠处插管固定,并在近肝门处结扎和另行插管,可分别收集到胰液和胆汁。
有时也可通过制备胰瘘和胆囊瘘来获得胰液和胆汁。
睡眠剥夺模型
实验用金属箱直径35 cm, 每箱装1只大鼠。尤其对慢性疾病模型来说,动物须有一定的生存期,便于长期观察使用,以免模型完成时动物已频于或毙于。REMSD 各组分别置于直径为6.5 cm的小站台上,对照组大鼠置于直径15 cm的大站台上,周围是水环境,水深3 cm,平台在水面以上1 cm,于平台以上14 cm 处放笼罩,上面放水和食物。水温和室温保持在25 C,每日换水并打扫实验箱。REMSD 组大鼠在小台上屈曲而立,在快动眼睡眠(rapid eye movement sleep, REMS) 时,由于伴随全身肌肉松弛和节律性垂头,大鼠落入水中而惊醒,再爬上站台。用此方法自18:00开始连续剥夺大鼠的REMS至相应实验时间点。
旷场实验( open field test, OFT )
实验装置为高60 cm、 底面边长100 cm、内壁涂黑的无盖方箱,底面平均分为25个小方格,正上方2 m处架一摄像机,镜头对准箱底,实验在安静环境下进行,大鼠置于方箱底面中心,同时进行摄像和计时,3 min 后停止摄像,更换动物后,继续进行实验。而4周组大鼠未出现典型肺qi肿及气道狭窄结论:COPD的形成与吸烟时间有关,在吸烟量相同条件下,吸烟时间越长,气道和肺组织病变越重,气流受限的发生率越高。2次实验之间清洗箱壁及底面,以免上次动物余留的信息影响下次实验结果。计分方法:通过放像设备,观察大鼠3 min内越过的格子数为水平得分,后肢站立次数为垂直得分,两者之和为OFT总得分。REMSD实验前后均进行旷场实验。
缺钾动物模型饲料需要注意什么?
钾的作用:它参与细胞中糖和蛋白质的代谢,维持神经健康,并显示正常的心律。如果高钠引起gao血压,则钾具有jiang压作用。缺钾会导致心律不齐,心跳加快,心电图异常,虚弱和超敏反应,zui终可能导致心脏骤停。
1.实验组的饮食选择:
在准备定量饮食时,由于全谷物含有大量的钾,因此很难引起钾缺乏。使用精制饲料,您可以自由控制饲料中的钾含量,但您应注意以下方面:
低①低钾饲料:这种饲料中钾的轻度缺乏一般而言,饮食研究营养性钾缺乏症或由于慢性脏疾病引起的钾缺乏症,并且与慢性缺乏症有关,且喂养时间相对较长。由于它是钾的症状,因此请确保饲料中钾的含量不要太低。
②钾缺乏饲料:饲料中钾的含量很低,没有钾的临界值。通常针对急性缺钾研究这种饲料,但是由于钾的极度缺乏,动物血液中的钾急剧下降,引起巨大的湍流,容易si亡。 ,有必要缩短进给时间以缩短观察时间。
2.对照组饲料选择:
精饲料缺乏钾,对照组也应使用精饲料来制备正常的钾含量饲料。请注意以下几点:
①饮食中的钾含量过高,经常对照饮食中的钾含量不符合标准。此控制实际上是高钾饮食,低于阈值。
②设定钾含量时,在准备饲料之前必须注意实验动物的类型,因为饲料中对钾含量的要求因动物而异,敏感性也不同。
也就是说,在选择模型进给时,无论是实验组还是对照组,都应从多个角度设置微量元素设定值的参数范围,以避免过度短缺和超负荷的问题。需要考虑的。
大动脉转位致紫绀型心脏病动物模型
【造模方法】体重为1.5~2.0kg雄性新西兰兔,按30mg/kg体重的剂量经耳缘静脉注she硫喷妥钠麻l醉,然后每隔30min静脉注she3~5mg/kg体重的剂量维持麻l醉。多样硬化模型(EAE)EAE模型可由来自髓鞘的蛋白如髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG))和完全弗氏佐剂(CFA)免yi诱导,mian疫当天及两天后腹腔注射百ri咳毒su(PTX)而构建。动物行仰卧位固定,前胸部皮肤常规去毛后消毒,作前正中无菌手术切口,切开皮肤、皮下组织及肌层,于第6、第7肋间水平横断胸骨,延正中线向上剪开胸骨,撑开器撑开,剪开心包,暴露心脏,注意保持纵隔胸膜的完整。游离肺动脉后,用4号丝线双活结结扎左心耳根部以阻断血流,于左心耳内注入1%肝素,用侧壁钳钳夹肺动脉左侧壁,在与左心耳对应部位剪开4~5mm的切口,用8/0的无损伤尼龙缝合线将肺动脉与左心耳侧侧吻合,先连续外翻缝合后壁,再间断外翻缝合前壁。缝线打结前排尽空气,先松开左心耳根部的结扎线,再缓慢松开肺动脉上的侧壁钳。生理盐水冲洗胸腔,置入硅胶引流片,关胸。术后每日肌肉注she青l霉l素40万U以预防感l染,共5d,术后3d拔取引流条。手术当中观察左心耳的颜色变化。于术后第4周,麻l醉,经腹l股l沟处切口l,l暴露股动脉,抽血测定pH值、氧分压(PO2)、二氧化碳分压(PCO2)、氧饱和度(SaO2)、血红蛋白含量(Hb)、红细胞比容(Hct)。采血后处死动物,观察心脏及吻合情况。术中吻合完成时可见左心耳颜色明显变暗,术后4周处死动物可见双心室轻度扩大,以右心室明显,吻合口通畅,直径为3~4mm,吻合口处光滑。术后1周动物的PO2、SaO2明显降低。术后第4周,PO2和SaO2的降低程度有所减小,考虑是代偿的原因。注意吻合口的大小要严格控制在4~5mm,太大时,严重的低氧会造成动物早期死l亡;太小时,有不能满足实验的要求,且容易形成血l栓而堵塞吻合口。