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PCR实验室为什么要进行三区隔离?
PCR反应过程中不断进行升温降温,液体蒸发又冷凝,PCR管中部分空气形成气溶胶,携带大量的DNA扩增产物(注意,1ng扩增产物中可作为模板的DNA片段数量,超过1ng起始模板中可扩增DNA片段数量的几百万倍甚至更高。比如人的基因组DNA有30亿个bp,要扩增的单拷贝基因片段是300bp,1ng起始模板中可以作为模板DNA片段只占总起始模板DNA总量的千万分之一)。如果在实验室打开含PCR扩增产物的管盖,大量携带DNA扩增产物的气溶胶就会涌出,扩散到空气中,从而对环境造成污染。
虽然在整个空间环境中DNA的含量很低,但由于理论上只要有1个可做为模板的DNA片段也能PCR扩增成功,这就是为什么在污染环境中阴性对照也能扩增出条带的原因。所以在PCR实验室(比如临床PCR检验实验室),通常有四区隔离(或至少是三区隔离)的要求。
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PCR实验室建设的几个注意事项:标准的四区分隔和气流控制:标准的四区分隔:试剂准备、标本制备、PCR扩增检测和扩增产物检测四个独立的实验区。每个独立实验区设置有缓冲区,空气压力严格按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区逐渐递减方式进行,防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。
消毒:在4个实验区和4个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
机械连锁不锈钢传递窗:试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,方便实验室工作人员传递物品又可减少实验室人员进出实验,确保试剂和标本在传递过程中不受污染室。
地面:室内地面建议使用PVC材质地面,具有耐腐蚀,耐磨损,平整度好,并且容易清扫。地角线用阴角铝装饰,严密性好且美观。
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PCR实验室的设计规范
1、区域布局合理
PCR扩增试验室原则上分为4个独立的工作区,即试剂准备区、样品处理区、核酸扩增区、产物分析区。为避免交叉污染,必须严格按照单一方向进入每个工作区,每个实验区之间的试剂和样品转移应通过转移窗口进行。
2、标准的三区分隔
PCR过程可分为试剂制备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区,整个实验区设置有一个整体缓冲走廊,每个独立的实验区都设有一个缓冲区。
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